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细胞冻存程序降温仪介绍与步骤
发布时间:2017-11-01   点击次数:6833次

 细胞冻存程序降温仪介绍与步骤!

    在细胞培养检测实验在实验仪器、培养基等等工作上都要耗费不少的人力和体力。好在很久以前就有高人发明了细胞保存这个实验步骤,将暂时多出来的细胞冰冻保存,以zui大程度保存细胞活力。


一、细胞冷冻保存
1.  材料:
生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0。  4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪,品牌上海拓纷)
2。  冷冻保存方法:
(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16~18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。
-20 ℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降温:利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1~-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
3。  步骤:
(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。
(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、血清,逐滴加入二甲基亚砜 (DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。
(3)离心收集培养之细胞,用加血清的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0.  1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。
(4)取与细胞悬液等量的冻存液,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSOzui后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。

    程序控制冷冻装置俗称:程序降温仪,也称为程序冷冻仪、胚胎冷冻仪、细胞冷冻仪、程控降温仪;广泛用于冻存细胞、胚胎等。采用微机控制技术,专用软件,能较准确地控制液氮的施放量,从而保证被冻存的生物制品以适宜的冷冻速率降温冷冻。该仪器具有操作简便、人机界面清楚。 



  我国临床低温医学工作发展迅速,促进了移植医学的发展,特别是在骨髓、造 血干细胞、皮肤、角膜、内分泌腺体、以及血管和瓣膜等的冷冻保存和移植应用取 得了显著成绩。成功的造血干细胞移植依赖于造血干细胞活力的保存。生物样品在 降温冷冻过程中,当由液态向固态变化的相变期内会释放一定热量,使其温度回升, 不控制降温速率的冷冻过程将会导致组织细胞死亡。准确地测定生物样品的相变点, 用微机编制降温程序,以便在样品相变时加大液氮输入量,克服相变样品温度的回 升,使细胞安全而迅速地度过相变期,这是提高被冻样品成活率的关键环节。

 ☆主要技术指标☆
     温度控制范围:40℃~-180℃.
     温度精度:    误差<1℃
     降温速度:    0.1℃/分~50℃/分范围内可选
     升温速度:    0。1℃/分~30℃/分范围内可选


☆仪器结构☆:本仪器由以下四部分构成(标准配置):
温控系统:在机箱上配置高精度智能温控器,该温控器通过RS485通讯协议和电脑连接;
电脑软件:在电脑中运行上位机软件,即可设定控温程序,对箱体控温;
冷冻箱:  内外全不锈刚结构。冷冻容机不小于200*200*200毫米。可同时容纳冷冻管160个或血袋8个。
液氮罐及液氮加压器: 液氮加压器安装在30立升的液氮罐上,使罐内自增压,调节阀保持压力稳定.
☆软件功能☆
1、显示功能:
运行显示如图:。每步操作,每个功能都有屏幕显示。实时显示仪器工作状态﹑温度数据和曲线。

2、 编程功能:
可编制任意段数的用户程序.计算机按照用户程序控制冷冻过程.用户程序可方便地编制﹑修改﹑存储﹑调出.开机自动调出当前用户程序.
3、运行控制功能:
随机恒温功能: 可随时进入,随时解除恒温。
自动控制:设定程序后,可完全自动运行。
手动控制: 程控时手控可参与控制.也可完全手控。
4、数据处理功能
每次冷冻的全部数据和有关信息,都能自动形成一个数据文件存储下来;
温度数据和速度可按指定时间间隔列表或显示温度曲线。
可迅速方便地双向检索已存入的数据文件;
温度曲线可局部放大,便于研究关键段的细微变化;
还有一些功能恕不一一列出,这些功能如能配合使用,将为您的冷冻带来极大的方便。
5、软件升级
  随着公司软件不断的更新,用户可享受免费升级服务.
 
详细配置清单

 

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